English Title: High precision size measurement and determination of the topology of subchromosomal domains after molecular labelling under consideration of theinfluence of cell fixation

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Abstract

Lichtoptische Untersuchungen der dynamischen Zellkernarchitektur in vivo benötigen zum jetzigen Zeitpunkt aufwendige Markierungs- und Detektionstechniken. Für einige Fragestellungen, wie zum Beispiel die Größe und Lage von Genen, sind Messungen in fixierten Präparaten sinnvoll. In dieser Arbeit wurde der Einfluss der Fixierung auf die Morphologie von Zellkernen sowie auf die Größe und Position subchromosomaler Domänen im Zellkern quantitativ untersucht. Die Quantifizierung der Größen als laterale Ausdehnung erfolgte mittels dem multi point model. Die Morphologie der Zellkerne wird durch die Art der Fixierung und die Hybridisierung nicht einheitlich beeinflusst. Die laterale Ausdehnung der untersuchten Domänen unterscheidet sich nur gering zwischen den Fixierungen. Eine unterschiedliche Sensitivität innerhalb mitotischer Chromosomen gegenüber denaturierenden Prozessen konnte ebenfalls quantifiziert werden.

Translation of abstract (English)

Current light optical measurements of the dynamic nuclear cell architecture in vivo require elaborate labelling and detection techniques. Questions regarding the size and position of subchromosomal domains can be adressed more easily in fixed cells. In the present work the influence of fixation on the morphology of cell nuclei as well as on the size and the positon of subchromosomal domains in nuclei were quantitatively investigated. The quantification of the lateral extent was calculated using the multi point model. The fixation and hybridization procedure had a non-uniform influence on the morphology of the cell nuclei. The lateral extent of the subchromosomal domains are only a slightly modifed between different fixations. A different sensitivity inside mitotic chromosomes to denaturation could be also quantified.